Plásmido CRISPR de Activación (h) JMJD3: sc-401883-ACT

El KDM6B humano codifica la desmetilasa de lisina de histonas JMJD3, una enzima dependiente de Fe(II)/2-oxoglutarato que elimina las marcas represivas H3K27me3 para promover programas de transcripción vinculados a transiciones del destino celular. JMJD3 se integra con la remodelación de la cromatina y con redes génicas reguladas por Polycomb para controlar el compromiso de linaje, la expresión de genes inflamatorios y la transcripción sensible a estímulos. A través de estos mecanismos epigenéticos, KDM6B contribuye a la regulación de la diferenciación, la senescencia y las vías de señalización inmunitaria, lo que lo hace relevante para estudios de trastornos del desarrollo, reprogramación transcripcional asociada al cáncer y estados inflamatorios crónicos. La alteración de la actividad o la expresión de JMJD3 puede modificar el paisaje de potenciadores y promotores, influyendo en vías posteriores como la transcripción dependiente de NF-κB y en programas oncogénicos o supresores tumorales dependientes del contexto.

JMJD3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KDM6B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

JMJD3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KDM6B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KDM6B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de JMJD3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KDM6B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de JMJD3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía JMJD3 en células tumorales con expresión de KDM6B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.