ITPase Double Nickase Plasmid (h): sc-410841-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das ITPase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- ITPase Double-Nickase-Plasmid (h) und ITPase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ITPA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: ITPase: sc-514409
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
ITPase Double Nickase Plasmid (h) | sc-410841-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das humane ITPA-Gen kodiert die Inosintriphosphat-Pyrophosphatase (ITPase), ein Enzym zur „Reinigung“ des Nukleotidpools, das nichtkanonische Purintriphosphate wie ITP und dITP hydrolysiert, um deren Fehleinbau in RNA und DNA zu verhindern. Indem ITPase inosinhaltige Nukleinsäuren begrenzt, unterstützt sie die Replikationstreue, die Integrität der Transkription sowie weiter gefasste Prozesse der Genomstabilität, die mit der Basenexzisionsreparatur und Reaktionen auf Replikationsstress verknüpft sind. Eine Störung der ITPA-Aktivität verändert den Purinstoffwechsel und kann die Empfindlichkeit gegenüber unausgeglichenen Nukleotidpools erhöhen, mit nachgelagerten Auswirkungen auf die Stabilität der mitochondrialen und nukleären DNA. Genetische Variation oder eine verminderte ITPase-Funktion wurde mit einer Anfälligkeit für Phänotypen im Zusammenhang mit Nukleinsäureschäden sowie mit unterschiedlichen Reaktionen in Studien zum Stoffwechsel von Purinanaloga in Verbindung gebracht, wodurch ITPA für mechanistische Untersuchungen der Genomintegrität relevant ist.
ITPase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITPA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITPA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITPA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITPA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.