Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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ITM2B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421189
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- ITM2B El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico ITM2B, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ITM2B Anticuerpo (C-8): sc-374362
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
ITM2B Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421189 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Itm2b codifica la proteína integral de membrana ITM2B (también conocida como BRI2), una proteína transmembrana de tipo II implicada en el tráfico de membranas y el procesamiento proteolítico dentro de los sistemas secretor y endolisosomal. ITM2B participa en la homeostasis neuronal y se ha relacionado con la regulación de la producción de péptidos amiloidogénicos mediante interacciones que influyen en el procesamiento de APP. En el ratón, la expresión de Itm2b está enriquecida en el sistema nervioso y se utiliza para estudiar vías que gobiernan el mantenimiento sináptico, el control de calidad de proteínas y la función lisosomal. La alteración de la biología de ITM2B se asocia con fenotipos relacionados con la neurodegeneración y proporciona un punto de entrada mecanístico para investigar el desequilibrio de la proteostasis y la neuropatología asociada al envejecimiento.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO ITM2B (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Itm2b en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Itm2b junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Itm2b tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ITM2B.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Itm2b para la investigación de la señalización de ITM2B, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Itm2b críticos para la función de ITM2B
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Itm2b para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido ITM2B CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido ITM2B CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Itm2b. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ITM2B (m) y el plásmido HDR ITM2B (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Itm2b para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Itm2b definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.