Plásmido Doble Nickase (h) ITI-H4: sc-403358-NIC

La cadena pesada 4 del inhibidor inter-alfa-tripsina (ITIH4) es una glicoproteína secretada, enriquecida en el hígado, que sufre procesamiento proteolítico en el plasma y se vincula con la estabilización del entorno extracelular durante la inflamación. Como miembro de la familia de inhibidores inter-alfa-tripsina, ITIH4 se asocia con las respuestas de fase aguda y con procesos de remodelación regulados por proteasas que se entrecruzan con la coagulación, la actividad del complemento y la homeostasis de la matriz extracelular. Se han descrito cambios en la abundancia de ITIH4 y en sus patrones de fragmentación en estados inflamatorios sistémicos y en múltiples cánceres, lo que respalda su uso como objetivo relacionado con biomarcadores para estudios mecanísticos. Investigar la función de ITIH4 ayuda a aclarar cómo las redes de proteasas circulantes y la señalización inflamatoria moldean las respuestas al daño tisular y los cambios del microambiente asociados a tumores.

ITI-H4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITIH4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITIH4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITIH4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITIH4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.