Plasmide CRISPR d'Activation (h) ITI-H4: sc-403358-ACT

ITIH4 code la chaîne lourde 4 de l’inhibiteur inter-α-trypsine (ITI-H4), une glycoprotéine sécrétée enrichie dans le foie, qui circule dans le plasma et participe à la biologie de la matrice extracellulaire ainsi qu’aux processus inflammatoires régulés par des protéases. ITI-H4 est associée à la protéolyse de la phase aiguë et au remodelage de matrices riches en hyaluronane via des interactions au sein du réseau de la famille des inhibiteurs inter-α, influençant l’homéostasie tissulaire lors de lésions et d’inflammation. Des altérations de l’expression ou du processing d’ITIH4 ont été rapportées dans des états inflammatoires systémiques et dans de multiples signatures protéomiques liées au cancer, ce qui étaye son utilité comme lecture mécanistique dans des études du sécrétome associées aux maladies. Dans des modèles cellulaires et plasmatiques, ITI-H4 constitue un nœud accessible pour examiner comment les programmes hépatiques façonnent la signalisation extracellulaire, des voies adjacentes à la coagulation et le dialogue croisé immuno-stromal.

ITI-H4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITIH4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ITI-H4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITIH4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITIH4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ITI-H4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITIH4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ITI-H4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ITI-H4 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITIH4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.