Plásmido CRISPR de Activación (h) ITI-H4: sc-403358-ACT
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmdo de Activación CRISPR (h) ITI-H4 es un sistema de activación de la trascripción mediante una activación sinérgica (SAM), diseñado para incrementar la expresión de un gen concreto
- Los Plásmdo de Activación CRISPR (h) ITI-H4 incluyen los siguientes tres plásmidos, con un radio 1:1:1 : plásmido codificador de la nucleasa Cas 9 desactivada (dCas9), (D10A y N863A) fusionadas al dominio de transactivación VP64 y el gen de resistencia a blasticidina; plásmido codificador de la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 y el gen de resistencia a Higromicina; plásmido codificador de la secuencia diana específica de 20 nt de ARN y el gen de resistencia a puromicina.
- El complejo SAM resultante se une en un punto específico a unos 200 -250 nt aguas arriba del inicio de la transcripción del gen diana y ofrece un potente punto de reclutamiento de factores de transcripción para un eficiente incremento de la activación genica.
- Los gRNA codificados por el plásmido de activación CRISPR ITI-H4 (h) y el plásmido de activación CRISPR ITI-H4 (h2) se dirigen a regiones reguladoras distintas situadas aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción de ITIH4. Puede que haya uno o ambos diseños disponibles
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ITI-H4 Anticuerpo (F-9): sc-515353
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido CRISPR de Activación (h) ITI-H4 | sc-403358-ACT | 20 µg | $397.00 |
ITIH4 codifica la cadena pesada 4 del inhibidor inter-α-tripsina (ITI‑H4), una glucoproteína secretada, enriquecida en hígado, que circula en el plasma y participa en la biología de la matriz extracelular y en procesos inflamatorios regulados por proteasas. ITI‑H4 está vinculada a la proteólisis asociada a la fase aguda y a la remodelación de matrices ricas en hialuronano mediante interacciones dentro de la red de la familia del inter‑α‑inhibidor, influyendo en la homeostasis tisular durante la lesión y la inflamación. Se han descrito alteraciones en la expresión o el procesamiento de ITIH4 en estados inflamatorios sistémicos y en múltiples firmas proteómicas relacionadas con el cáncer, lo que respalda su utilidad como lectura mecanística en estudios del secretoma asociados a enfermedad. En modelos celulares y de plasma, ITI‑H4 proporciona un nodo manejable para examinar cómo los programas hepáticos moldean la señalización extracelular, las vías adyacentes a la coagulación y el diálogo cruzado inmunoestromal.
ITI-H4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITIH4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.
ITI-H4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITIH4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.
Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITIH4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ITI-H4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITIH4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ITI-H4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ITI-H4 en células tumorales con expresión de ITIH4 silenciada o reducida.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.