Plasmide Double Nickase (h) ITI-H1: sc-403720-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ITI-H1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ITI-H1 Double Nickase (h) et le plasmide ITI-H1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ITIH1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ITI-H1 Antibody (F-5): sc-514541
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ITI-H1 | sc-403720-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ITI-H1 | sc-403720-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ITIH1 code la chaîne lourde 1 de l’inhibiteur inter‑α‑trypsine (ITI‑H1), une glycoprotéine sécrétée d’origine hépatique qui contribue à l’organisation de la matrice extracellulaire par une liaison covalente à l’hyaluronane via le complexe inter‑α‑inhibiteur contenant la bikunine. Cette activité influence la stabilité de la matrice péricellulaire, les interactions cellule–matrice et les microenvironnements inflammatoires en modulant des processus dépendants de l’hyaluronane. ITI‑H1 est souvent étudiée dans le cadre de la biologie de la phase aiguë, de la régulation des protéases dans l’espace extracellulaire et du remodelage des matrices stromales. Des modifications de l’expression d’ITIH1 ou des variations génétiques ont été rapportées dans des contextes inflammatoires et fibrosants, ainsi que dans des études du microenvironnement associé aux cancers, ce qui appuie son intérêt comme cible liée à la biologie de la matrice et aux associations avec des maladies dans des modèles humains.
ITI-H1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITIH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITIH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITIH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITIH1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.