ITF-2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402815

Descripción general

TCF4 codifica el factor de transcripción de hélice‑bucle‑hélice básica (bHLH) ITF‑2 (también conocido como E2‑2), un regulador de unión al ADN que modula programas de expresión génica específicos de linaje mediante el reconocimiento de motivos E‑box y la dimerización con otras proteínas bHLH. ITF‑2 participa en redes transcripcionales que gobiernan la diferenciación celular, la proliferación y el patrón de desarrollo, y se cruza con vías que moldean las decisiones de destino celular y la regulación génica dependiente de la cromatina. La actividad desregulada de TCF4 se ha vinculado con la biología del neurodesarrollo y la especificación de células inmunitarias, y el control transcripcional alterado por ITF‑2 se asocia con fenotipos relevantes para enfermedad, incluidos trastornos del desarrollo y la reprogramación transcripcional asociada a malignidad. Como regulador dependiente del contexto, TCF4 se estudia con frecuencia por su papel en el control de la dinámica de la expresión génica, la actividad de potenciadores (enhancers) y los resultados de vías aguas abajo en diversos modelos celulares humanos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO ITF-2/TCF4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TCF4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TCF4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TCF4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína ITF-2/TCF4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TCF4 para la investigación de la señalización de ITF-2/TCF4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TCF4 críticos para la función de ITF-2/TCF4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TCF4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido ITF-2/TCF4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TCF4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR ITF-2/TCF4 (h) y el plásmido HDR ITF-2/TCF4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TCF4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TCF4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.