Islet-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421157
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Islet-1 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Islet-1, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Islet-1 Anticuerpo (B-1): sc-390793
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Islet-1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421157 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Isl1 de ratón codifica el factor de transcripción LIM-homeodominio Islet-1 (ISL1), un regulador clave de la especificación de linaje y la diferenciación en el sistema nervioso en desarrollo, el páncreas y los tejidos cardiovasculares. ISL1 coordina programas transcripcionales que controlan el mantenimiento de progenitores, las decisiones de destino celular y la maduración, actuando mediante interacciones dependientes del contexto con cofactores de unión a LIM y redes de genes homeobox. En la biología de los islotes pancreáticos, Isl1 favorece la expresión de genes endocrinos y la maduración funcional, mientras que en progenitores de neuronas motoras y cardíacos contribuye al patrón de desarrollo y la morfogénesis. Por lo tanto, la actividad desregulada de ISL1 es relevante para estudios mecanísticos de la disfunción de islotes asociada a la diabetes, el desarrollo cardíaco congénito y las vías del neurodesarrollo en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Islet-1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Isl1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Isl1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Isl1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Islet-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Isl1 para la investigación de la señalización de Islet-1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Isl1 críticos para la función de Islet-1
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Isl1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Islet-1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Islet-1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Isl1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Islet-1 (m) y el plásmido HDR Islet-1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Isl1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Isl1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.