Plasmide CRISPR d'Activation (h) ISG15: sc-400996-ACT

L’ISG15 humain code un modificateur de type ubiquitine induit par l’interféron, conjugué à des protéines cellulaires et virales via la cascade d’ISGylation, modulant ainsi la signalisation de l’immunité innée et la protéostasie. ISG15 régule les réponses à l’interféron de type I en modulant des voies telles que la signalisation JAK–STAT et en influençant l’activité et la stabilité d’effecteurs antiviraux clés, avec en outre des fonctions de facteur immunomodulateur sécrété. Par ces mécanismes, ISG15 affecte les réponses cellulaires à l’infection virale, aux signaux inflammatoires et au stress, et son dérèglement a été associé à des phénotypes de signalisation de l’interféron anormaux ainsi qu’à des mécanismes de maladies liées au système immunitaire. En recherche sur le cancer et les maladies infectieuses, ISG15 est fréquemment étudié comme un médiateur dépendant du contexte de l’échappement immunitaire, de l’inflammation et des programmes transcriptionnels induits par l’interféron.

ISG15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ISG15 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ISG15 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ISG15 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ISG15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ISG15. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ISG15 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ISG15 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ISG15 dans les cellules tumorales présentant une expression de ISG15 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.