IRX4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405618

Panoramica

IRX4 (Iroquois homeobox 4) codifica un fattore di trascrizione con dominio homeobox che regola programmi di espressione genica spazio-temporali durante lo sviluppo, con ruoli di rilievo nel cuore e in altre linee mesodermiche. In quanto proteina nucleare che si lega al DNA, IRX4 contribuisce a reti trascrizionali che determinano le decisioni di destino cellulare, la differenziazione e la patterning dei tessuti modulando geni bersaglio a valle e interagendo con vie più ampie regolate da homeobox. Un’espressione deregolata di IRX4 o dei suoi circuiti regolatori è stata implicata in alterazioni della segnalazione dello sviluppo e in stati trascrizionali dipendenti dal contesto osservati in oncologia, rendendolo rilevante per studi sulla specificazione di linea e sulla regolazione genica associata a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO IRX4 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene IRX4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del IRX4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto IRX4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina IRX4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di IRX4 per lo studio della segnalazione di IRX4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni IRX4 critici per la funzione di IRX4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di IRX4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal IRX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal IRX4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus IRX4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal IRX4 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR IRX4 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia IRX4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio IRX4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.