Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRX3 (h): sc-404632

Présentation

IRX3 (Iroquois homeobox 3) code un facteur de transcription à homéoboîte qui contribue à établir des programmes transcriptionnels lors de la mise en place du plan embryonnaire et de l’organogenèse, avec des rôles dépendants du contexte dans la spécification du destin cellulaire et la différenciation. Dans les cellules humaines, IRX3 s’intègre à des réseaux de signalisation du développement, notamment des voies liées aux signalisations Wnt et BMP, afin d’orienter les décisions de lignée et l’expression génique spécifique des tissus. Au-delà du développement, une régulation altérée d’IRX3 a été associée à des phénotypes métaboliques et à des modifications de la biologie des adipocytes, et une expression dérégulée d’IRX3 a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux. Ces caractéristiques font d’IRX3 un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel, l’état de différenciation et les circuits de régulation génique pilotés par les voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRX3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IRX3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IRX3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IRX3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRX3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IRX3 pour l'étude de la signalisation de IRX3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IRX3 essentiels à la fonction de IRX3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IRX3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IRX3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IRX3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRX3 plasmide HDR (h) et le IRX3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IRX3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IRX3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.