Plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-4 (h): sc-402033

Présentation

Le substrat du récepteur de l’insuline 4 (IRS4) est une protéine adaptatrice cytoplasmique qui couple les récepteurs activés de l’insuline et des facteurs de croissance de type insuline (IGF) aux réseaux de signalisation en aval. Grâce à des interactions favorisant l’activation des voies PI3K–AKT–mTOR et RAS–MAPK, IRS-4 influence la prolifération, le métabolisme et la survie cellulaires, avec des rôles dépendants du contexte, distincts de ceux des autres membres de la famille IRS. Des altérations de l’expression et de la signalisation d’IRS4 ont été associées à une dérégulation de la signalisation des facteurs de croissance en oncologie, ainsi qu’à des phénotypes plus larges de signalisation métabolique, ce qui en fait une cible pertinente pour analyser la communication croisée entre récepteurs à activité tyrosine kinase. L’étude d’IRS-4 permet d’explorer les mécanismes de la dynamique de transduction du signal, la régulation par rétroaction et le recâblage des voies de signalisation en conditions de stress oncogénique ou métabolique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO IRS-4 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène IRS4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du IRS4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert IRS4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine IRS-4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en IRS4 pour l'étude de la signalisation de IRS-4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de IRS4 essentiels à la fonction de IRS-4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de IRS4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le IRS-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le IRS-4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus IRS4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le IRS-4 plasmide HDR (h) et le IRS-4 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie IRS4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles IRS4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.