Plásmido Doble Nickase (h) IRS-2: sc-400474-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)IRS-2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa IRS-2 (h) y el plásmido de doble nickasa IRS-2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a IRS2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IRS-2 Anticuerpo (B-5): sc-390761
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) IRS-2 | sc-400474-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) IRS-2 | sc-400474-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El sustrato del receptor de insulina 2 (IRS2) codifica IRS-2, un adaptador de anclaje que transmite señales desde los receptores de insulina e IGF-1 hacia efectores aguas abajo que controlan el metabolismo de la glucosa, la homeostasis lipídica, el crecimiento celular y la supervivencia. Tras la fosforilación de tirosinas mediada por el receptor, IRS-2 recluta proteínas con dominio SH2 como PI3K para activar la señalización AKT/mTOR y se conecta con las vías RAS–MAPK para regular programas transcripcionales y metabólicos. La actividad de IRS-2 influye en la sensibilidad a la insulina, la gluconeogénesis hepática y la función de los adipocitos, y las alteraciones en la señalización de IRS2 se han vinculado con disfunción metabólica y resistencia a la insulina. La señalización dependiente de IRS-2 desregulada también se estudia en contextos de proliferación aberrante y respuestas al estrés, donde la remodelación de la vía PI3K–AKT contribuye a fenotipos relevantes para la enfermedad.
IRS-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IRS2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IRS2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IRS2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IRS2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.