Plasmide CRISPR d'Activation (h) IRS-1: sc-400096-ACT

IRS1 humain code le substrat du récepteur de l’insuline 1 (IRS‑1), une protéine adaptatrice centrale qui relie les récepteurs de l’insuline et de l’IGF‑1 activés aux voies de signalisation en aval PI3K–AKT–mTOR et RAS–MAPK. Grâce au recrutement, dépendant de la phosphorylation sur tyrosine, d’effecteurs portant un domaine SH2, IRS‑1 régule l’absorption du glucose, la synthèse du glycogène, la traduction protéique, la croissance cellulaire et la survie, tandis que la phosphorylation sur sérine/thréonine assure un contrôle clé de rétroaction négative. Une signalisation IRS‑1 dérégulée et des profils de modifications post‑traductionnelles sont largement utilisés comme marqueurs moléculaires dans les études de résistance à l’insuline, de stress métabolique et de phénotypes induits par des facteurs de croissance. Des altérations de l’expression d’IRS1 ou de la connectivité de son réseau de signalisation ont également été étudiées dans des contextes incluant le diabète de type 2, l’inflammation associée à l’obésité et le métabolisme des cellules cancéreuses.

IRS-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IRS1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IRS-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IRS1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IRS1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IRS-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IRS1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IRS-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IRS-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de IRS1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.