IRF-7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400450-ACT

O fator regulador de interferon 7 (IRF7/IRF-7) é um regulador mestre da transcrição das respostas de interferon do tipo I, que amplifica a imunidade antiviral inata a jusante dos receptores de reconhecimento de padrões. Quando ativado por vias como TLR7/9–MyD88 e pela sinalização RIG-I/MAVS, o IRF-7 promove a transcrição dos genes IFNA e de programas de genes estimulados por interferon (ISGs) que moldam a produção de citocinas, a apresentação de antígenos e circuitos de retroalimentação inflamatória. A atividade desregulada do IRF7 tem sido implicada em assinaturas aberrantes de interferon observadas em fenótipos de suscetibilidade a vírus e em condições inflamatórias imunomediadas, tornando-o um nó-chave para o estudo das interações hospedeiro–patógeno e da homeostase imune. Em células humanas, o IRF-7 também interage com as vias NF-κB e JAK/STAT para coordenar respostas transcricionais mais amplas a ácidos nucleicos e ao estresse celular.

IRF-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IRF7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IRF-7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IRF7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IRF7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IRF-7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IRF7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IRF-7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IRF-7 em células tumorais com expressão de IRF7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.