Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
IRF-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424184
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- IRF-5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico IRF-5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IRF-5 Anticuerpo (10T1): sc-56714
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
IRF-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424184 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
El gen Irf5 de ratón codifica el factor regulador de interferón 5 (IRF-5), un factor de transcripción que integra el reconocimiento inmunitario innato con programas génicos inflamatorios posteriores. IRF-5 se activa aguas abajo de los receptores tipo Toll endosomales y de la señalización dependiente de MyD88, promoviendo la expresión del interferón de tipo I y de redes de citocinas proinflamatorias mediante la regulación coordinada de genes estimulados por interferón. En macrófagos, células dendríticas y células B, IRF-5 contribuye a la polarización y a las respuestas efectoras, modulando el equilibrio de citocinas y la inmunidad impulsada por antígenos. La actividad desregulada de IRF-5 se ha vinculado a fenotipos autoinmunes e inflamatorios, lo que convierte a Irf5 en un nodo útil para diseccionar vías relevantes para la desregulación inmunitaria sistémica en modelos murinos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO IRF-5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Irf5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Irf5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Irf5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IRF-5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Irf5 para la investigación de la señalización de IRF-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Irf5 críticos para la función de IRF-5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Irf5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido IRF-5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IRF-5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Irf5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IRF-5 (m) y el plásmido HDR IRF-5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Irf5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Irf5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.