Plásmido CRISPR de Activación (h) IRF-5: sc-400920-ACT

IRF5 codifica el factor regulador del interferón 5 (IRF-5), un factor de transcripción que coordina programas génicos de la inmunidad innata y de la inflamación aguas abajo de los receptores de reconocimiento de patrones y de la señalización por citocinas. IRF-5 contribuye a las respuestas de interferón de tipo I, a redes transcripcionales asociadas a NF-κB y a la polarización de macrófagos/células dendríticas mediante la regulación de genes estimulados por interferón y de citocinas proinflamatorias. La actividad alterada de IRF5 se ha vinculado con una señalización inmunitaria desregulada en la autoinmunidad sistémica y en fenotipos inflamatorios crónicos, lo que lo convierte en un nodo estudiado con frecuencia en inmunogenética y defensa del huésped. En células humanas, la función de IRF-5 se investiga habitualmente en vías relacionadas con la señalización de receptores tipo Toll, las respuestas antivirales y el control transcripcional de la producción de citocinas.

IRF-5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IRF5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IRF-5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IRF5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IRF5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IRF-5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IRF5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IRF-5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IRF-5 en células tumorales con expresión de IRF5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.