Plásmido CRISPR de Activación (h) IRF-1: sc-400551-ACT

El IRF1 humano codifica el factor regulador de interferón 1 (IRF-1), un factor de transcripción de unión al ADN que integra señales de interferón e inflamación para controlar la defensa antiviral, la presentación de antígenos y las decisiones sobre el destino celular. IRF-1 actúa aguas abajo de la señalización JAK/STAT y coopera con NF-κB y miembros de la familia IRF para regular la transcripción de genes estimulados por interferón, vías de citocinas y componentes del procesamiento del MHC de clase I. A través de la regulación de la vigilancia inmunitaria, la apoptosis y los programas de control del crecimiento, la actividad de IRF1 se estudia con frecuencia en contextos de biología de la infección, interacciones tumor–sistema inmunitario y estados inflamatorios crónicos. La desregulación de la señalización de IRF-1 se ha asociado con respuestas inmunitarias innatas y adaptativas alteradas y con cambios en la sensibilidad celular al estrés y a la estimulación por citocinas.

IRF-1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IRF1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IRF-1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IRF1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IRF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IRF-1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IRF1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IRF-1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IRF-1 en células tumorales con expresión de IRF1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.