Plasmide Double Nickase (h) IRE1α: sc-400576-NIC

ERN1 code l'enzyme 1 alpha requise pour l'inositol (IRE1α), une kinase/endoribonucléase transmembranaire résidente du réticulum endoplasmique (RE) qui agit comme capteur principal des protéines mal repliées et comme nœud central de la réponse aux protéines mal conformées (UPR). En situation de stress du RE, IRE1α s'oligomérise et active l'épissage de l'ARNm XBP1 médié par son activité RNase ainsi que la dégradation régulée dépendante d'IRE1 (RIDD), remodelant les programmes transcriptionnels et traductionnels qui gouvernent la protéostase, la capacité de sécrétion, l'inflammation et l'apoptose. Par le biais d'interactions avec les voies de signalisation PERK et ATF6 et l'activation en aval des voies JNK et NF-κB, ERN1 influence la signalisation de l'immunité innée et l'adaptation métabolique. Une activité IRE1α–XBP1 dérégulée est impliquée dans des affections caractérisées par un stress chronique du RE, notamment les programmes de survie des cellules cancéreuses, la neurodégénérescence, le diabète et les troubles inflammatoires, ce qui en fait une cible fréquente pour les études mécanistiques.

IRE1α Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ERN1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ERN1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ERN1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ERN1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.