Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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IRAP Double Nickase Plasmid (h): sc-403731-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IRAP Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IRAP Double-Nickase-Plasmid (h) und IRAP Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf LNPEP abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IRAP: sc-365300
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IRAP Double Nickase Plasmid (h) | sc-403731-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IRAP Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403731-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Leucyl-/Cystinyl-Aminopeptidase (LNPEP), auch als insulinresponsive Aminopeptidase (IRAP) bekannt, ist eine zinkabhängige M1-Metallopeptidase, die in endosomalen Kompartimenten lokalisiert und an reguliertem Membrantransport beteiligt ist. In insulinresponsiven Zellen wird IRAP gemeinsam mit GLUT4-Speichervesikeln transportiert und nach PI3K–AKT-Signalgebung zur Plasmamembran mobilisiert, wodurch LNPEP mit Glukoseaufnahme sowie Vesikelrecycling-Prozessen verknüpft ist. IRAP trägt zudem über das endosomale Trimmen von Peptiden zur Antigen-Kreuzpräsentation bei, prägt dadurch das MHC‑Klasse‑I‑Peptidrepertoire und beeinflusst die Immunüberwachung. Eine dysregulierte LNPEP/IRAP-Aktivität oder -Trafficking wurde mit veränderter metabolischer Homöostase und entzündlichen Signalzusammenhängen assoziiert, was sie für Studien zur Insulinwirkung, endosomalen Proteolyse und immunbezogenen Signalwegen relevant macht.
IRAP Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des LNPEP-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von LNPEP abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die LNPEP-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit LNPEP-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.