Partículas Lentivirales de Activación (m) IP3R-III: sc-421194-LAC

Itpr3 codifica el receptor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 3 (IP3R-III), un canal de liberación de Ca²⁺ del retículo endoplásmico que se activa aguas abajo de la señalización de GPCR y de receptores tirosina quinasa a través del IP3 generado por la PLC. Los transitorios de Ca²⁺ mediados por IP3R-III regulan procesos como la secreción, el transporte epitelial, la bioenergética mitocondrial y la expresión génica dependiente de Ca²⁺ mediante vías como calcineurina–NFAT y la señalización de CaMK. En tejidos de ratón, la expresión de IP3R-III está enriquecida en linajes epiteliales y secretores, lo que respalda estudios sobre señalización de Ca²⁺ polarizada, sitios de contacto RE–mitocondria y oscilaciones de calcio acopladas al estímulo. La actividad desregulada de IP3R-III y la homeostasis de Ca²⁺ se han vinculado a respuestas de estrés celular y a fenotipos relevantes para enfermedad que implican disfunción epitelial y señalización proliferativa aberrante, lo que convierte a Itpr3 en un nodo útil para el modelado mecanístico.

Las partículas de activación lentiviral IP3R-III (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Itpr3 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral IP3R-III (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Itpr3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de IP3R-III. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Itpr3 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.