Plasmide Double Nickase (h) IP3KA: sc-404638-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IP3KA correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IP3KA Double Nickase (h) et le plasmide IP3KA Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ITPKA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IP3KA Antibody (F-3): sc-271838
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) IP3KA | sc-404638-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) IP3KA | sc-404638-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ITPKA humain code l’inositol-trisphosphate 3-kinase A (IP3KA), une enzyme régulée par le Ca2+/calmoduline qui phosphoryle l’inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) afin de produire l’IP4, façonnant ainsi la dynamique de la signalisation calcique intracellulaire. En modulant la libération de Ca2+ dépendante de l’IP3 à partir du réticulum endoplasmique, IP3KA influence la fonction synaptique, le remodelage du cytosquelette et des programmes de signalisation dépendants de l’activité, notamment des voies qui couplent les transitoires calciques aux réponses transcriptionnelles. Dans les neurones, IP3KA est enrichie dans les épines dendritiques et a été associée à des mécanismes sous-tendant la plasticité et l’excitabilité via la régulation d’effecteurs sensibles au Ca2+. Le déséquilibre IP3/IP4 et l’homéostasie calcique altérée associés à une dérégulation d’ITPKA sont pertinents en neurobiologie et ont également été étudiés dans des contextes de signalisation aberrante et de phénotypes de migration dans des modèles de maladie.
IP3KA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITPKA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITPKA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITPKA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITPKA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.