Plásmido CRISPR de Activación (m) Integrin αX/ITGAX/CD11c: sc-421170-ACT

Itgax codifica la integrina αX (CD11c), que forma un heterodímero con ITGB2 para generar la integrina leucocitaria αXβ2 (CR4), la cual media la adhesión a superficies opsonizadas con iC3b y contribuye a la fagocitosis dependiente del complemento. CD11c se expresa de manera destacada en células dendríticas, subpoblaciones de macrófagos y otras poblaciones mieloides, conectando señales de la matriz extracelular y del complemento con la remodelación del citoesqueleto, la migración y la formación de la sinapsis inmunológica. Mediante señalización “outside-in” de integrinas, ITGAX influye en vías que involucran quinasas de la familia Src, Syk, PI3K y pequeñas GTPasas, las cuales regulan la captación y el tráfico de antígenos, así como programas génicos inflamatorios. La activación mieloide desregulada asociada a ITGAX y la presentación de antígenos se han implicado, en modelos murinos, en la inflamación autoinmune, la biología de infecciones crónicas y la remodelación del microambiente inmune tumoral.

Integrin αX/ITGAX/CD11c El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Itgax sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin αX/ITGAX/CD11c El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Itgax en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Itgax, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin αX/ITGAX/CD11c. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Itgax y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin αX/ITGAX/CD11c en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin αX/ITGAX/CD11c en células tumorales con expresión de Itgax silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.