Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin αX/ITGAX/CD11c: sc-401765-ACT

ITGAX codifica la integrina αX (CD11c), una subunidad α que forma un heterodímero con la integrina β2 (CD18) para constituir el receptor del complemento 4 (CR4), un receptor clave de adhesión y fagocitosis en células de la línea mieloide. CD11c media interacciones célula–célula y célula–matriz, el tráfico de leucocitos y el reconocimiento dependiente del complemento de dianas opsonizadas con iC3b, integrando señales de la activación “inside-out” de integrinas para regular la remodelación del citoesqueleto y la formación de la sinapsis inmunológica. Mediante una comunicación coordinada con la señalización de los receptores Fc y redes de quinasas aguas abajo, ITGAX influye en la captación de antígenos, la maduración de las células dendríticas y los programas de citocinas inflamatorias. La expresión desregulada de ITGAX o la abundancia de células CD11c+ se utiliza con frecuencia para estratificar la infiltración inmunitaria y los estados de activación mieloide en cáncer, inflamación autoinmune y contextos de infección crónica, lo que respalda estudios mecanísticos de la biología de enfermedades impulsadas por células mieloides.

Integrin αX/ITGAX/CD11c El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGAX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin αX/ITGAX/CD11c El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGAX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGAX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin αX/ITGAX/CD11c. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGAX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin αX/ITGAX/CD11c en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin αX/ITGAX/CD11c en células tumorales con expresión de ITGAX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.