Plásmido Doble Nickase (h) Integrin αL/ITGAL/CD11a: sc-402246-NIC

ITGAL codifica la integrina αL (CD11a), que se heterodimeriza con la integrina β2 (CD18) para formar LFA-1, un receptor de adhesión leucocitaria esencial para el tráfico de células inmunitarias y las interacciones célula–célula. La unión de LFA-1 a ligandos de la familia ICAM regula la adhesión firme, la migración transendotelial y la formación de la sinapsis inmunológica, conectando señales extracelulares con la remodelación del citoesqueleto y vías de señalización como la señalización “outside-in” de integrinas, la activación de quinasas de la familia SRC y procesos asociados a las adhesiones focales. La actividad de ITGAL influye en los umbrales de activación linfocitaria, las funciones efectoras dependientes de antígeno y la coordinación de las respuestas inflamatorias. Las interacciones LFA-1–ICAM desreguladas y la expresión alterada de ITGAL se han implicado en patología mediada por el sistema inmunitario y en defectos de adhesión leucocitaria, lo que respalda su uso en estudios de inflamación, autoinmunidad y dinámica del microambiente tumoral–inmunitario.

Integrin αL/ITGAL/CD11a El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGAL en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGAL. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGAL. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGAL alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.