Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin αL/ITGAL/CD11a: sc-402246-ACT

ITGAL codifica la integrina αL (CD11a), que heterodimeriza con la integrina β2 (CD18) para formar LFA-1, un receptor de adhesión principal en los leucocitos. LFA-1 media la adhesión firme y la transmigración al unirse a ligandos de la familia ICAM y coordina la señalización “outside-in” que remodela el citoesqueleto de actina, favorece la formación de la sinapsis inmunológica y ajusta los umbrales de activación de los linfocitos T. La actividad de ITGAL se regula mediante señalización “inside-out” de integrinas aguas abajo de receptores de quimiocinas y de la señalización del TCR, lo que la vincula al tráfico leucocitario, el reconocimiento de antígenos y las respuestas inflamatorias. La disfunción de ITGAL/LFA-1 se ha asociado con alteraciones en la adhesión y la señalización de células inmunitarias en contextos de enfermedades autoinmunes e inflamatorias, así como en interacciones tumor–sistema inmune, lo que la convierte en un nodo útil para estudios de inmunología mecanística.

Integrin αL/ITGAL/CD11a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGAL sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin αL/ITGAL/CD11a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGAL en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGAL, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin αL/ITGAL/CD11a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGAL y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin αL/ITGAL/CD11a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin αL/ITGAL/CD11a en células tumorales con expresión de ITGAL silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.