Plásmido Doble Nickase (h) Integrin αIIb/ITGA2B/CD41: sc-400614-NIC

ITGA2B codifica la integrina αIIb (CD41), un receptor de adhesión enriquecido en plaquetas y megacariocitos que forma un heterodímero con la integrina β3 (αIIbβ3) para unirse al fibrinógeno y a otros ligandos que contienen la secuencia RGD. Esta integrina es un mediador central de la agregación plaquetaria, la remodelación del citoesqueleto y la señalización bidireccional outside-in/inside-out que coordina la adhesión, el extendido celular y la secreción de gránulos. La señalización de αIIbβ3 se integra con vías dependientes de Src/FAK, la señalización PI3K–AKT y redes reguladoras de actina para controlar la formación del tapón hemostático y la estabilidad del trombo. La variación genética o la expresión alterada de ITGA2B se asocia con trastornos hereditarios de la función plaquetaria y se estudia ampliamente en el contexto de la trombosis desregulada y los fenotipos de sangrado.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGA2B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGA2B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGA2B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGA2B alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.