Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin αIIb/ITGA2B/CD41: sc-400614-ACT

ITGA2B codifica la integrina αIIb (CD41), un receptor de adhesión enriquecido en plaquetas y megacariocitos que forma un heterodímero con la integrina β3 (αIIbβ3) para mediar la unión a fibrinógeno y al factor de von Willebrand durante la agregación plaquetaria. Tras la unión al ligando, αIIbβ3 impulsa la señalización “inside-out” y “outside-in”, que coordina la remodelación del citoesqueleto, la dinámica de las adhesiones focales y la secreción de gránulos mediante vías que involucran talina/kindlina, quinasas de la familia Src, FAK, PI3K–AKT y MAPK. La expresión de ITGA2B y su disponibilidad en la superficie celular son fundamentales para la trombopoyesis y la formación del tapón hemostático, lo que vincula este eje con estudios sobre la función plaquetaria, las respuestas a la lesión vascular y el diálogo cruzado inflamatorio. La desregulación o los defectos hereditarios en ITGA2B se asocian con trastornos de adhesión y agregación plaquetarias y proporcionan un punto de entrada mecanístico para investigar fenotipos de sangrado anormal y la maduración de los megacariocitos.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA2B sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA2B en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA2B, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin αIIb/ITGA2B/CD41. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA2B y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin αIIb/ITGA2B/CD41 en células tumorales con expresión de ITGA2B silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.