Plásmido Doble Nickase (h) Integrin β8/ITGB8: sc-401379-NIC

ITGB8 codifica la integrina β8, una subunidad receptora de adhesión transmembrana de paso único que se asocia con la integrina αV para formar αVβ8, conectando ligandos de la matriz extracelular con redes intracelulares del citoesqueleto y de señalización. αVβ8 es un regulador clave de la activación del TGF-β latente en la superficie celular, dando forma a programas transcripcionales dependientes de SMAD que influyen en las interacciones epitelio–mesénquima, la modulación inmunitaria y la remodelación tisular. A través de la señalización “outside-in” mediada por integrinas y de la dinámica de las adhesiones focales, ITGB8 contribuye a la adhesión celular, la migración y la organización de la barrera. La expresión desregulada de ITGB8 o la actividad de αVβ8 se ha asociado con estados alterados de señalización de TGF-β observados en contextos como la remodelación del microambiente tumoral, procesos fibróticos y el desarrollo neurovascular.

Integrin β8/ITGB8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGB8 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGB8. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGB8. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGB8 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.