Plásmido CRISPR de Activación (m) Integrin β8/ITGB8: sc-435838-ACT

Itgb8 codifica la integrina β8, una subunidad β que se asocia con αv para formar el receptor αvβ8, una molécula de adhesión en la superficie celular que conecta ligandos de la matriz extracelular con redes del citoesqueleto y de señalización. En tejidos de ratón, ITGB8 contribuye a la migración celular, la remodelación tisular y la comunicación epitelio‑mesénquima, y es un regulador clave de la activación de TGF‑β latente mediante interacciones con complejos asociados a la MEC. A través del crosstalk con la señalización de adhesiones focales y las vías TGF‑β/SMAD, ITGB8 influye en programas de diferenciación, propiedades de barrera y el comportamiento de células inmunitarias. La actividad desregulada de ITGB8 se ha asociado con remodelación fibrótica, microambientes inflamatorios y biología tumoral en estudios preclínicos y traslacionales, lo que respalda su utilidad como nodo mecanístico para el interrogatorio de vías.

Integrin β8/ITGB8 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Itgb8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin β8/ITGB8 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Itgb8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Itgb8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin β8/ITGB8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Itgb8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin β8/ITGB8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin β8/ITGB8 en células tumorales con expresión de Itgb8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.