Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin β8/ITGB8: sc-401379-ACT

ITGB8 codifica la subunidad β8 de la integrina, que se asocia con αv para formar el receptor αvβ8, el cual media la adhesión célula–matriz y la señalización bidireccional entre la matriz extracelular y el citoesqueleto. La integrina β8 es un regulador clave de la activación de TGF-β latente y de los programas transcripcionales dependientes de SMAD aguas abajo, influyendo en las interacciones epitelio–mesénquima, la dinámica del citoesqueleto y la remodelación tisular. A través de la interacción funcional con las vías de señalización de adhesiones focales, Rho GTPasas y MAPK, ITGB8 afecta la migración celular, la función de barrera y la modulación del microambiente inmunitario. La expresión alterada de ITGB8 o la actividad de αvβ8 se han asociado con remodelación fibrótica y programas de invasión asociados a tumores, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos de la biología de TGF-β y de la señalización dependiente de integrinas.

Integrin β8/ITGB8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGB8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin β8/ITGB8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGB8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGB8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin β8/ITGB8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGB8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin β8/ITGB8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin β8/ITGB8 en células tumorales con expresión de ITGB8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.