Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α8/ITGA8: sc-402020-ACT

ITGA8 codifica la integrina α8, una subunidad α que forma un heterodímero con β1 para constituir un receptor de unión a laminina y a la matriz extracelular que regula la adhesión célula–matriz, la organización del citoesqueleto y la mecanotransducción. La integrina α8/ITGA8 contribuye a la señalización de adhesiones focales y a vías posteriores que involucran FAK/SRC, GTPasas de la familia Rho y MAPK, las cuales coordinan la migración celular, la diferenciación y la remodelación tisular. Se estudia de forma destacada en contextos mesenquimales y estromales, incluida la organogénesis renal y la biología de los fibroblastos, donde las alteraciones en la señalización mediada por integrinas pueden influir en el depósito de matriz extracelular y la morfogénesis de órganos. La expresión desregulada de ITGA8 o la señalización de integrinas se ha asociado con fenotipos fibróticos y con la remodelación del microambiente tumoral, lo que la hace relevante para investigaciones sobre invasión, supervivencia dependiente de la adhesión y programas transcripcionales impulsados por la matriz.

Integrin α8/ITGA8 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α8/ITGA8 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α8/ITGA8. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α8/ITGA8 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α8/ITGA8 en células tumorales con expresión de ITGA8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.