Plásmido Doble Nickase (h) Integrin β7/ITGB7: sc-404928-NIC

ITGB7 codifica la integrina β7, una subunidad receptora transmembrana de adhesión que se asocia con α4 o con αE para formar α4β7 y αEβ7, coordinando el tráfico y la retención de leucocitos en los microambientes tisulares. Estas integrinas se unen a ligandos como MAdCAM-1 y la E-cadherina para favorecer la adhesión celular, la migración y el posicionamiento de células inmunitarias, acoplando la unión extracelular con la remodelación del citoesqueleto y la señalización bidireccional “inside-out/outside-in”. Las vías dependientes de ITGB7 contribuyen al homing (direccionamiento) de linfocitos hacia los tejidos linfoides asociados al intestino y a la regulación de las respuestas inmunitarias mucosas. La señalización de integrinas desregulada y la expresión alterada de ITGB7 se estudian en trastornos inflamatorios y en contextos de inmuno-oncología en los que se ven perturbadas la localización celular, la dinámica de adhesión y la vigilancia inmunitaria.

Integrin β7/ITGB7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGB7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGB7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGB7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGB7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.