Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α7/ITGA7: sc-401678-ACT

ITGA7 codifica la integrina α7, una subunidad α de unión a laminina que se heterodimeriza principalmente con la integrina β1 para formar un receptor clave en la superficie celular para la adhesión a la matriz extracelular. La integrina α7/ITGA7 favorece la adhesión, la migración y la diferenciación de mioblastos y contribuye a la mecanotransducción y a la organización del citoesqueleto a través de vías de señalización de adhesión focal, incluidas las cascadas de FAK/Src, PI3K–AKT y MAPK. Mediante la regulación de las interacciones célula–matriz, ITGA7 influye en la integridad y la remodelación tisular, con especial relevancia para la biología del músculo esquelético. La alteración de la expresión o la función de la integrina α7/ITGA7 se ha asociado con fenotipos neuromusculares y relacionados con distrofias musculares, y también se ha investigado en contextos de invasión tumoral y comportamiento metastásico, donde la dinámica de adhesión se ve alterada.

Integrin α7/ITGA7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α7/ITGA7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α7/ITGA7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α7/ITGA7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α7/ITGA7 en células tumorales con expresión de ITGA7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.