Plásmido Doble Nickase (h) Integrin β5/ITGB5: sc-401017-NIC

ITGB5 codifica la integrina β5, un receptor de adhesión transmembrana que principalmente forma heterodímeros con la integrina αV para constituir αVβ5, conectando ligandos de la matriz extracelular con el citoesqueleto de actina. Este receptor participa en el ensamblaje de adhesiones focales y en la señalización bidireccional que regula la adhesión, el extendimiento, la migración y la mecanotransducción celular mediante vías como FAK/SRC, PI3K–AKT y MAPK. αVβ5 también contribuye a la señalización asociada a la endocitosis y puede influir en la dinámica de activación de TGF-β según el contexto celular. La expresión desregulada de ITGB5 o la señalización de integrinas se ha asociado con cambios en el comportamiento invasivo, respuestas angiogénicas y programas de remodelación observados en múltiples modelos de cáncer y enfermedades fibróticas.

Integrin β5/ITGB5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGB5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGB5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGB5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGB5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.