Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin β5/ITGB5: sc-401017-ACT

ITGB5 codifica la integrina β5, un receptor de adhesión transmembrana que forma un heterodímero con la integrina αV para constituir αVβ5, conectando ligandos de la matriz extracelular con el citoesqueleto de actina e iniciando la señalización de fuera hacia dentro. La integrina β5 regula la dinámica de las adhesiones focales, la migración celular y la supervivencia a través de vías que incluyen FAK/SRC, PI3K–AKT y la señalización MAPK, con funciones adicionales en endocitosis y en el diálogo cruzado con programas impulsados por TGF-β. Al modular las interacciones célula–matriz y la mecanotransducción, ITGB5 influye en el comportamiento epitelial y endotelial, el tráfico de células inmunes y la remodelación del microambiente tumoral. La expresión o señalización desregulada de ITGB5 se ha asociado con invasión, angiogénesis, remodelación relacionada con fibrosis y fenotipos metastásicos en múltiples contextos de enfermedad.

Integrin β5/ITGB5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGB5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin β5/ITGB5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGB5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGB5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin β5/ITGB5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGB5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin β5/ITGB5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin β5/ITGB5 en células tumorales con expresión de ITGB5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.