Integrin α5/ITGA5/CD49e Double Nickase Plasmid (h): sc-400546-NIC

ITGA5 kodiert das Integrin α5 (CD49e), eine α‑Untereinheit, die mit β1 ein Heterodimer bildet und so den α5β1‑Fibronectinrezeptor erzeugt – einen zentralen Vermittler der Zell–extrazellulären-Matrix-Adhäsion und der Mechanotransduktion. Die Bindung an Fibronectin löst den Aufbau fokaler Adhäsionen sowie Signalübertragung über die FAK/SRC-, PI3K–AKT- und MAPK‑Signalwege aus und koordiniert damit den Umbau des Aktinzytoskeletts, Migration, Proliferation und Überleben. ITGA5‑abhängige Adhäsionsdynamiken beeinflussen die epithelial–mesenchymale Transition, angiogene Programme und die Gewebeumgestaltung durch Crosstalk mit Rho‑GTPasen und der Signalgebung von Wachstumsfaktorrezeptoren. Eine dysregulierte α5β1‑Aktivität wird häufig im Kontext von Tumorinvasion und Metastasierung, Fibrose sowie vaskulärer und inflammatorischer Pathophysiologie untersucht, bei denen veränderte Matrixinteraktionen abnormes Zellverhalten antreiben.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITGA5-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITGA5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITGA5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITGA5-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.