Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α5/ITGA5/CD49e: sc-400546-ACT

ITGA5 codifica la integrina α5 (CD49e), un receptor de adhesión transmembrana que forma un heterodímero con la integrina β1 para constituir el receptor de fibronectina α5β1. Este complejo media la adhesión célula–matriz extracelular y la señalización bidireccional que coordina el ensamblaje de adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto de actina y la mecanotransducción, integrando señales de las vías FAK/SRC, PI3K–AKT y MAPK. A través de la regulación de la migración, la proliferación y la supervivencia celulares, ITGA5 contribuye a la morfogénesis tisular, la reparación de heridas y las respuestas angiogénicas. La expresión o señalización desregulada de ITGA5 se investiga con frecuencia en contextos de invasión y metástasis tumoral, fibrosis y remodelación inflamatoria, donde las interacciones célula–matriz alteradas impulsan fenotipos patogénicos.

Integrin α5/ITGA5/CD49e El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α5/ITGA5/CD49e El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α5/ITGA5/CD49e. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α5/ITGA5/CD49e en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α5/ITGA5/CD49e en células tumorales con expresión de ITGA5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.