Plásmido Doble Nickase (h) Integrin α4/ITGA4/CD49d: sc-401336-NIC

ITGA4 codifica la integrina α4 (CD49d), un receptor de adhesión que se asocia con β1 o β7 para formar los heterodímeros α4β1 y α4β7, los cuales regulan el tráfico de leucocitos, la adhesión firme y la migración transendotelial. Al unirse a ligandos como VCAM1 y la fibronectina, la integrina α4 coordina la señalización “outside-in”, que se conecta con la remodelación del citoesqueleto y vías de supervivencia, incluidas las de adhesiones focales, PI3K–AKT y MAPK. La actividad de ITGA4 contribuye al posicionamiento de las células inmunitarias dentro de los tejidos e influye en los microambientes inflamatorios al modular las interacciones célula–célula y célula–matriz. La adhesión y migración dependientes de integrina α4, cuando están desreguladas, se han implicado en enfermedades inflamatorias crónicas y en la biología de neoplasias hematológicas, lo que respalda su uso como un punto de interés en investigación para estudios de interacción entre el sistema inmunitario y el estroma tumoral.

Integrin α4/ITGA4/CD49d El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGA4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGA4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGA4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGA4 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.