Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α4/ITGA4/CD49d: sc-401336-ACT

ITGA4 codifica la integrina α4 (CD49d), una subunidad α que se asocia con β1 o β7 para formar las integrinas VLA-4 (α4β1) o α4β7, las cuales median la adhesión célula–célula y célula–matriz. Mediante su unión a VCAM1, al dominio CS-1 de la fibronectina y a MAdCAM1, la integrina α4 regula el tráfico de leucocitos, la adhesión firme y la migración transendotelial, integrando la señalización de fuera hacia dentro con la remodelación del citoesqueleto. La señalización vinculada a ITGA4 converge con las vías de adhesión focal, MAPK y PI3K para influir en la supervivencia, la activación y el comportamiento migratorio en compartimentos inmunitarios y estromales. Las alteraciones en la expresión o la función de ITGA4 se analizan con frecuencia en estudios sobre el reclutamiento de células inflamatorias, la infiltración tisular asociada a autoinmunidad y las interacciones tumor–microambiente que implican diseminación metastásica y el posicionamiento de células inmunitarias.

Integrin α4/ITGA4/CD49d El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α4/ITGA4/CD49d El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α4/ITGA4/CD49d. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α4/ITGA4/CD49d en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α4/ITGA4/CD49d en células tumorales con expresión de ITGA4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.