Plásmido Doble Nickase (m) Integrin β3/ITGB3/CD61: sc-421175-NIC

El gen Itgb3 de ratón codifica la integrina β3 (ITGB3/CD61), un receptor transmembrana de adhesión que se asocia con αIIb o αV para formar integrinas heterodiméricas esenciales para la agregación plaquetaria, la adhesión célula–matriz y la señalización de fuera hacia dentro y de dentro hacia fuera. ITGB3 regula la dinámica de las adhesiones focales y la remodelación del citoesqueleto mediante vías que incluyen FAK/Src, PI3K–AKT y las GTPasas de la familia Rho, coordinando la migración, la supervivencia y la mecanotransducción. En contextos inmunitarios y estromales, las interacciones mediadas por ITGB3 con ligandos de la matriz extracelular influyen en el tráfico inflamatorio y la remodelación tisular, mientras que la alteración de la señalización de integrinas se ha vinculado a disfunción hemostática y a fenotipos vasculares anómalos y del microambiente asociado a tumores en modelos experimentales. Estas propiedades hacen de Itgb3 un objetivo valioso para estudiar redes de señalización dependientes de integrinas, la regulación génica dependiente de la adhesión y respuestas específicas del contexto a señales biomecánicas.

Integrin β3/ITGB3/CD61 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Itgb3 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Itgb3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Itgb3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Itgb3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.