Plásmido Doble Nickase (h) Integrin β3/ITGB3/CD61: sc-400216-NIC

ITGB3 codifica la integrina β3 (CD61), un receptor de adhesión transmembrana que forma heterodímeros con la integrina αIIb o αV para constituir los complejos αIIbβ3 y αVβ3, los cuales se unen a ligandos de la matriz extracelular y transmiten señales bidireccionales a través de la membrana plasmática. Mediante su acoplamiento a reguladores de las adhesiones focales y del citoesqueleto, la integrina β3 modula la adhesión, el extendido celular, la migración y la mecanotransducción, activando vías como FAK/SRC, PI3K–AKT y las GTPasas de la familia Rho. En plaquetas y megacariocitos, la señalización de αIIbβ3 es fundamental para la agregación y la formación de trombos, mientras que αVβ3 contribuye a las interacciones de células endoteliales y tumorales con la matriz. Las alteraciones en la expresión o la función de ITGB3 se han vinculado con desregulación de la hemostasia, la biología vascular, la inflamación y la invasión y metástasis asociadas al cáncer, lo que lo convierte en un nodo ampliamente estudiado en redes de señalización dependientes de la adhesión.

Integrin β3/ITGB3/CD61 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGB3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGB3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGB3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGB3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.