Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α3/ITGA3/CD49c: sc-400841-ACT

ITGA3 codifica la integrina α3 (CD49c), una subunidad α que forma el heterodímero α3β1 para mediar la adhesión célula–matriz extracelular, en particular a las lamininas de las membranas basales. Al acoplarse a los complejos de adhesión focal, ITGA3 regula la remodelación del citoesqueleto, la polaridad celular y la migración direccional, integrando señales de las vías FAK/Src, PI3K–AKT y MAPK que configuran programas de supervivencia y motilidad. La integrina α3β1 también contribuye a la organización epitelial y a la integridad de la barrera al coordinar la señalización dependiente de la adhesión y la comunicación cruzada con receptores de factores de crecimiento. La desregulación de la expresión de ITGA3 y las alteraciones en la señalización de integrinas se han asociado con invasión aberrante y comportamiento metastásico en múltiples contextos oncológicos, así como con un deterioro de los procesos de reparación epitelial en escenarios inflamatorios y fibróticos.

Integrin α3/ITGA3/CD49c El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α3/ITGA3/CD49c El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α3/ITGA3/CD49c. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α3/ITGA3/CD49c en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α3/ITGA3/CD49c en células tumorales con expresión de ITGA3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.