Plásmido Doble Nickase (h) Integrin β2/ITGB2/CD18: sc-400921-NIC

ITGB2 codifica la integrina β2 (CD18), una subunidad de receptor de adhesión restringida a leucocitos que se empareja con cadenas α (p. ej., ITGAL/CD11a, ITGAM/CD11b, ITGAX/CD11c) para formar integrinas β2 que controlan el tráfico de las células inmunitarias y sus funciones efectoras. Estos heterodímeros regulan la adhesión firme al endotelio, la migración transendotelial y la formación de la sinapsis inmunológica mediante señalización de fuera hacia dentro y de dentro hacia fuera, vinculada a la remodelación del citoesqueleto, la dinámica de las adhesiones focales y vías asociadas a MAPK/PI3K. Las interacciones dependientes de CD18 con ligandos de la familia ICAM coordinan el reclutamiento de neutrófilos y linfocitos durante la inflamación y modulan los programas de fagocitosis y estallido oxidativo. Las alteraciones genéticas o funcionales de ITGB2 se asocian con defectos de adhesión leucocitaria y respuestas inflamatorias modificadas, lo que lo convierte en una diana clave para estudiar los mecanismos de defensa del hospedador y de desregulación inmunitaria.

Integrin β2/ITGB2/CD18 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGB2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.