Plásmido Doble Nickase (h) Integrin α2/ITGA2/CD49b: sc-400913-NIC

ITGA2 codifica la integrina α2 (CD49b), que se heterodimeriza con la integrina β1 para formar el receptor de colágeno/laminina α2β1, el cual media la adhesión célula–matriz extracelular y la mecanotransducción. A través del acoplamiento a la señalización de la quinasa de adhesión focal (FAK), de quinasas de la familia Src y de la remodelación del citoesqueleto dependiente de las GTPasas Rho, ITGA2 influye en la migración, la invasión y las respuestas de supervivencia celular frente a la composición y la rigidez de la matriz. En plaquetas y otros tipos celulares, α2β1 favorece la adhesión dependiente de colágeno y la señalización “de fuera hacia dentro” de las integrinas, que puede modular los estados de activación. La expresión desregulada de ITGA2 o la señalización de integrinas se estudia con frecuencia en el contexto de las interacciones tumor–estroma, la remodelación fibrótica, el tráfico de células inflamatorias y fenotipos asociados a la trombosis.

Integrin α2/ITGA2/CD49b El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITGA2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITGA2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITGA2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITGA2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.