Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α2/ITGA2/CD49b: sc-400913-ACT

ITGA2 codifica la integrina α2 (CD49b), un receptor de adhesión que se asocia con la integrina β1 para formar el complejo α2β1, uno de los principales receptores de colágeno y laminina en muchos tipos de células epiteliales, endoteliales e inmunitarias. Al acoplar la interacción con la matriz extracelular a la señalización intracelular, α2β1 regula el ensamblaje de adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y la mecanotransducción a través de vías que incluyen FAK/SRC, PI3K–AKT y MAPK. La actividad de ITGA2 influye en la migración celular, la adhesión plaquetaria y la remodelación tisular, y la expresión o función alteradas se han asociado con fibrosis, respuestas inflamatorias e invasión y metástasis de células tumorales. Como receptor de superficie con salidas de señalización dependientes del contexto, ITGA2 se estudia con frecuencia en biología de la matriz extracelular, el crosstalk entre integrinas y modelos de interacción célula–matriz.

Integrin α2/ITGA2/CD49b El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α2/ITGA2/CD49b El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α2/ITGA2/CD49b. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α2/ITGA2/CD49b en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α2/ITGA2/CD49b en células tumorales con expresión de ITGA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.