Plásmido CRISPR de Activación (h) Integrin α11/ITGA11: sc-402541-ACT

ITGA11 codifica la integrina α11, una subunidad α que se asocia con β1 para formar un receptor de unión al colágeno, implicado de manera destacada en la adhesión célula–matriz extracelular y la mecanotransducción. La integrina α11/β1 favorece la remodelación del colágeno, la migración de fibroblastos y la organización del microambiente estromal, conectando el anclaje a la matriz con la dinámica del citoesqueleto y con vías de señalización como las adhesiones focales/FAK, las quinasas de la familia SRC y las cascadas MAPK y PI3K-AKT aguas abajo. A través de estos procesos, ITGA11 contribuye a la remodelación tisular y a respuestas fibróticas, y su desregulación se estudia en contextos que incluyen señalización estromal alterada y comportamiento celular invasivo. Por ello, modular la expresión de ITGA11 resulta útil para investigar microambientes ricos en colágeno, la señalización dependiente de la adhesión y la plasticidad fenotípica impulsada por la matriz.

Integrin α11/ITGA11 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ITGA11 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Integrin α11/ITGA11 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ITGA11 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ITGA11, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Integrin α11/ITGA11. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ITGA11 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Integrin α11/ITGA11 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Integrin α11/ITGA11 en células tumorales con expresión de ITGA11 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.