Plásmido Doble Nickase (m) Integrin β1/ITGB1: sc-421171-NIC

El gen Itgb1 de ratón codifica la integrina β1 (ITGB1), una subunidad central de receptores de adhesión que forma heterodímeros con múltiples integrinas α para mediar las interacciones célula–matriz extracelular. La señalización de ITGB1 coordina el ensamblaje de adhesiones focales, la remodelación del citoesqueleto y la mecanotransducción mediante vías que incluyen FAK/SRC, PI3K–AKT y MAPK, influyendo en la migración, la proliferación y la supervivencia. Al regular la dinámica de adhesión epitelial y mesenquimal, ITGB1 es clave para la organización tisular, el tráfico de células inmunitarias y la reparación de heridas. La actividad desregulada de ITGB1 y la señalización de adhesión se han implicado ampliamente en la remodelación inflamatoria y en la invasión y metástasis asociadas a tumores, lo que convierte a Itgb1 en un objetivo frecuente para estudios funcionales de fenotipos dependientes de la adhesión.

Integrin β1/ITGB1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Itgb1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Itgb1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Itgb1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Itgb1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.