IMPDH2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-410835-LAC

IMPDH2 kodiert die Inosin-5′-monophosphat-Dehydrogenase 2, ein geschwindigkeitsbestimmendes Enzym im de-novo-Biosyntheseweg der Guanin-Nukleotide, das IMP in XMP umwandelt und so die zellulären Pools von GMP und GTP aufrechterhält. Durch die Kontrolle der Nukleotidverfügbarkeit beeinflusst IMPDH2 die DNA- und RNA-Synthese, das Fortschreiten des Zellzyklus sowie die metabolische Anpassung während Proliferation und Immunaktivierung. Seine Aktivität verknüpft den Purinstoffwechsel mit der transkriptionellen und translationalen Kapazität und hat nachgelagerte Effekte auf Replikationsstress und die mitochondriale Funktion. Eine dysregulierte IMPDH2-Expression oder ein veränderter Stofffluss durch die Guanin-Nukleotidsynthese wurde mit proliferativen Phänotypen und einer veränderten Funktion von Immunzellen in Verbindung gebracht, was IMPDH2 zu einem relevanten Ziel für die Untersuchung metabolischer Abhängigkeiten in krankheitsrelevanten zellulären Modellen macht.

IMPDH2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente IMPDH2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

IMPDH2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der IMPDH2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen IMPDH2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen IMPDH2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.