Plásmido CRISPR de Activación (h) IL-8RB: sc-401404-ACT

CXCR2 codifica el receptor beta de interleucina‑8 (IL‑8RB), un GPCR de siete dominios transmembrana que se une a quimiocinas CXC ELR+ como CXCL8/IL‑8 para dirigir la quimiotaxis, la adhesión y la activación de neutrófilos y otras células mieloides. La unión del ligando al receptor desencadena señalización dependiente de Gαi que modula los flujos de calcio intracelular y activa las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT y NF‑κB, moldeando la expresión de genes inflamatorios y la remodelación del citoesqueleto. La señalización de CXCR2 coordina el tráfico leucocitario, señales angiogénicas y respuestas tisulares a la lesión, y la actividad desregulada de los receptores de quimiocinas está implicada en la inflamación crónica y en el reclutamiento de células inmunitarias asociado a tumores. Por ello, CXCR2/IL‑8RB se estudia ampliamente en modelos de microambientes inflamatorios, biología de células mieloides y migración celular impulsada por quimiocinas.

IL-8RB El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CXCR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IL-8RB El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CXCR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CXCR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IL-8RB. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CXCR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IL-8RB en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IL-8RB en células tumorales con expresión de CXCR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.